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    淺談熒光定量pcr技術

    熒光增白劑是一種熒光染料,也是一種復雜的有機化合物,其特性就是能產生藍色熒光,可使肉眼看到的物質很白。


    含熒光劑的面膜在紫外光照射下,顯現出非常大面積的亮藍色。稍微接觸面膜液體,就會粘附上熒光劑成分,拿了面膜的手,也有熒光。用清水沖洗手3遍后, 手上的熒光劑在紫外光照射下依然發出強烈的亮藍色光,幾乎沒有洗掉。改用洗手液清洗3遍,照射后手上也發出藍光,只是比清水的效果略好一些。用洗面奶清洗,與洗手液的效果差不多,都無法徹底清洗掉殘留在手上的熒光。


    PCR擴增是在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。在擴增的指數期對起始模板進行定量,在擴增過程中,熒光信號隨著PCR產物的增加而增強。剛開始時, 探針結合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。
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